【原理】
免疫細胞化學技術(shù)的原理是：把組織中的特異分子作為抗原，用各種在顯微鏡下可見的標記物標記特異抗體或標記抗原抗體復合物，使特異的免疫化學反應(yīng)具有可見性，從而間接地顯示抗原，達到在細胞或細胞器水平定位特異分子的目的。
【步驟】
SP法的基本步驟
1. 石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水
2. 3％的過氧化氫去離子水孵育5-10min，消除內(nèi)原性過氧化物酶。蒸餾水沖洗。
3. 抗原修復：微波熱修復，取一定量的0.01M檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）于微波盒中，微波加熱至沸騰將脫蠟水化后的切片放入已沸騰的緩沖液中，中繼續(xù)處理10~15 min取出微波盒，冷卻至室溫取出玻片。先用蒸餾水洗2次，后用PBS洗5min。
0.01M檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）：檸檬酸三鈉 3g，檸檬酸 0.4g，加蒸餾水至1000ml。
4. 封閉：滴加正常山羊血清封閉液室溫10~20 min甩去多余液體，勿洗
5. 滴加適當稀釋的一抗，37℃ 2-3h或4℃過夜。
6. PBS沖洗，3分鐘×3次
7. 滴加生物素化二抗，37℃孵育10-15min。
8. PBS沖洗，3分鐘×3次
9. 滴加辣根酶標記鏈酶卵白素，室溫或37℃孵育10-15min
10. PBS沖洗，3分鐘×3次
11. AEC/DAB顯色
12. 蒸餾水反復洗滌后，甘油明膠封片。甘油明膠：明膠 40g、甘油 250ml、蒸餾水 210ml、石炭酸 5ml，混勻，過濾。
13. 顯微圖象分析：取處理組和對照組各2張免疫組織化學的玻片，每張玻片隨機取5個視野，OLYMPUS IX70倒置顯微鏡下觀察，KODAK數(shù)碼相機拍照記錄。捷達形態(tài)學圖象分析系統(tǒng)分析記錄圖片的總IOD值。
在線客服
